雞卵清蛋白-膽酸偶聯物的制備方法有哪些


雞卵清蛋白-膽酸偶聯物的制備方法主要有以下幾種:
化學交聯法
碳二亞胺法:利用碳二亞胺類試劑(如EDC等)作為偶聯劑,使膽酸的羧基與雞卵清蛋白的氨基發生縮合反應,形成酰胺鍵。具體步驟如下:將膽酸和雞卵清蛋白分別溶解在不同的緩沖液中,調節pH值;然后將碳二亞胺試劑加入到膽酸溶液中,攪拌反應一段時間后,再加入雞卵清蛋白溶液,繼續反應;反應結束后,通過凝膠過濾、透析等方法純化偶聯物。
活化酯法:將膽酸與活化劑反應,生成活化酯中間體,再與雞卵清蛋白上的氨基等活性基團反應,形成偶聯物。例如,先將膽酸與N-羥基琥珀酰亞胺等活化劑在合適的溶劑中反應,生成活化酯;然后將雞卵清蛋白溶解在適當的緩沖液中,調節pH值,加入活化酯溶液,在一定溫度下反應一段時間;最后通過透析、離心等方法純化偶聯物。
琥珀酸酐法:膽酸的羧基與琥珀酸酐反應,生成帶有羧基的衍生物,再與雞卵清蛋白的氨基反應。具體操作是先將膽酸與琥珀酸酐在有機溶劑中反應,生成膽酸的琥珀酸酐衍生物;然后將該衍生物與雞卵清蛋白在緩沖液中反應,調節pH值和溫度,反應一段時間后,通過離心、透析等方法純化偶聯物。
其他方法
混合酸酐法:先將膽酸與氯甲酸異丁酯等試劑反應生成混合酸酐,再與雞卵清蛋白反應。
點擊化學法:利用點擊化學反應,如銅催化的疊氮-炔烴環加成反應等,將膽酸和雞卵清蛋白進行偶聯。
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