白藜蘆醇-雞卵清白蛋白偶聯物的制備方法有哪些


白藜蘆醇-雞卵清白蛋白偶聯物的制備方法主要有以下幾種:
化學交聯法
原理:利用化學交聯劑將白藜蘆醇與雞卵清白蛋白(OVA)進行共價結合。常用的交聯劑有戊二醛等。
步驟:
溶液制備:將白藜蘆醇溶解于適當的有機溶劑(如無水乙醇)中,制成白藜蘆醇溶液;將雞卵清白蛋白溶解于緩沖溶液(如PBS)中,制成雞卵清白蛋白溶液。
交聯反應:在一定的溫度和pH條件下,將白藜蘆醇溶液與雞卵清白蛋白溶液混合,加入適量的交聯劑,攪拌反應一定時間,使白藜蘆醇與雞卵清白蛋白發生交聯反應。
純化與表征:反應結束后,通過離心、透析等方法去除未反應的白藜蘆醇和交聯劑等雜質,得到純化的白藜蘆醇-雞卵清白蛋白偶聯物。然后利用紫外光譜、熒光光譜、SDS-PAGE等技術對偶聯物進行表征,確定其結構和純度。
納米包裹法
原理:利用納米材料將白藜蘆醇包裹在內部,形成納米顆粒,再與雞卵清白蛋白進行結合。
步驟:
納米顆粒制備:將白藜蘆醇與納米材料(如脂質體、聚合物納米粒等)混合,通過超聲、攪拌等方法制備成白藜蘆醇納米顆粒。
偶聯反應:將制備好的白藜蘆醇納米顆粒與雞卵清白蛋白溶液混合,在一定的條件下反應,使納米顆粒與雞卵清白蛋白結合。
純化與表征:通過離心、過濾等方法去除未結合的納米顆粒和雞卵清白蛋白,得到純化的白藜蘆醇-雞卵清白蛋白偶聯物。利用透射電子顯微鏡、動態光散射等技術對偶聯物進行表征,確定其粒徑和形態。
微膠囊法
原理:以壇紫菜多糖復合卵清蛋白作為壁材,將白藜蘆醇包裹在內部形成微膠囊。
步驟:
壇紫菜多糖分離純化:用纖維素DE-52離子交換層析柱和葡聚糖Sephadex G-100凝膠層析柱對壇紫菜多糖進行分離和純化,得到純化壇紫菜多糖組分PHP2。
微膠囊制備:將卵清蛋白(OVA)水溶液和PHP2水溶液分別置于(4±1)℃平衡(24±2)h;將白藜蘆醇溶于乙醇,得白藜蘆醇乙醇溶液;將白藜蘆醇乙醇溶液加入到平衡后OVA溶液中超聲,然后旋轉蒸發除去乙醇,再加入平衡后PHP2溶液,形成復合溶液;將復合溶液加熱后磁力攪拌,調節pH值3~4后震蕩,平衡;離心,離心所得的沉淀進行洗滌和干燥,得白藜蘆醇微膠囊。
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