鏈霉親和素-吖啶酯的制備方法有哪些


鏈霉親和素-吖啶酯的制備方法主要有以下幾種:
直接偶聯法
原理:利用鏈霉親和素與吖啶酯之間的化學反應,將兩者直接連接在一起。
操作步驟:
吖啶酯的活化:將吖啶酯溶解在適當的有機溶劑中,加入活化劑,如N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)等,在一定條件下反應,使吖啶酯的羧基活化,以便與鏈霉親和素的氨基結合。
偶聯反應:將活化后的吖啶酯溶液與鏈霉親和素溶液混合,在適宜的緩沖液中,控制反應溫度和時間,使吖啶酯與鏈霉親和素發生偶聯反應。反應結束后,通過透析、離心等方法去除未反應的試劑和雜質,得到鏈霉親和素-吖啶酯復合物。
間接偶聯法
原理:通過一個中間連接分子,將鏈霉親和素和吖啶酯連接起來。
操作步驟:
中間連接分子的選擇與活化:選擇合適的中間連接分子,如雙功能交聯劑,一端可以與鏈霉親和素的氨基結合,另一端可以與吖啶酯的羧基結合。將中間連接分子溶解在適當的溶劑中,加入活化劑進行活化。
與鏈霉親和素的偶聯:將活化后的中間連接分子溶液與鏈霉親和素溶液混合,在一定條件下反應,使中間連接分子與鏈霉親和素結合。
與吖啶酯的偶聯:將上述反應產物與吖啶酯溶液混合,在適宜的條件下進行反應,使吖啶酯與中間連接分子的另一端結合,從而形成鏈霉親和素-吖啶酯復合物。最后,通過純化步驟去除未反應的物質。
基于磁珠的制備方法
原理:利用磁珠表面的特定官能團,先將鏈霉親和素固定在磁珠上,再與吖啶酯進行偶聯。
操作步驟:
磁珠的選擇與處理:選擇表面帶有羧基或Tosyl官能團的磁珠,將其分散在適當的緩沖液中,加入活化劑,如EDC等,對磁珠表面的官能團進行活化。
鏈霉親和素的固定:將鏈霉親和素溶液加入到活化后的磁珠溶液中,在一定條件下反應,使鏈霉親和素固定在磁珠表面。
吖啶酯的偶聯:將固定有鏈霉親和素的磁珠與吖啶酯溶液混合,在適宜的條件下進行反應,使吖啶酯與鏈霉親和素結合。反應結束后,通過磁性分離等方法收集磁珠,并用緩沖液洗滌,去除未結合的物質,得到鏈霉親和素-吖啶酯-磁珠復合物。
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