如何使用 PC Biotin-PEG3-NHS carbonate ester 進行蛋白質標記?


名稱
中文名稱:PC生物素-PEG3-NHS酯
英文名稱:PCbiotin-PEG3-NHSester
化合物性質
CAS號:2353409-93-3
分子式:C36H52N6O15S
分子量:840.89
外觀:黃色實心
檢測圖譜:1H NMR
儲存條件:-20℃
結構式:
結構和性質
PC Biotin-PEG3-NHS carbonate ester 是一種功能化的生物素衍生物,它結合了生物素、聚乙二醇(PEG)鏈和NHS(N-hydroxysuccinimide)碳酸酯酯基團。這種特別的結構使得它在生物分子標記和化學修飾中具有廣泛的應用潛力。此外,它還具有光可切割特性,允許在沒有試劑的情況下從streptavidin微球上釋放捕獲的生物分子。
使用 PC Biotin-PEG3-NHS carbonate ester 進行蛋白質標記的一般步驟如下:
準備蛋白質溶液:將待標記的蛋白質溶解在適當的緩沖液中,確保蛋白質的穩定性和溶解性。
計算試劑用量:根據蛋白質的濃度和需要的標記程度,確定 PC Biotin-PEG3-NHS carbonate ester 的使用量。通常需要進行一些預實驗來優化試劑比例。
反應:在適當的條件下,將 PC Biotin-PEG3-NHS carbonate ester 加入到蛋白質溶液中。該試劑的 NHS 部分會與蛋白質上的伯胺基團特異性反應,形成氨基甲酸酯鍵,從而實現標記。反應條件可能會因具體實驗要求而有所不同,一般在室溫或稍高的溫度下進行一定時間的孵育。
控制反應時間:反應時間需要根據實際情況進行優化,以確保充分標記,同時避免過度反應導致蛋白質變性或其他不良影響。
終止反應(可選):根據需要,可以通過加入適當的淬滅劑或進行透析等方法來終止反應。
純化:標記后的蛋白質可能需要進行純化,以去除未反應的試劑和其他雜質。可以使用凝膠過濾、透析或其他合適的純化方法。
在整個過程中,需要注意以下幾點:
試劑的保存:PC Biotin-PEG3-NHS carbonate ester 對光和溫度敏感,應始終保持在低溫干燥、避光的條件下。
緩沖液的選擇:使用適合蛋白質穩定和反應進行的緩沖液。
優化條件:通過預實驗優化試劑用量、反應時間和溫度等條件,以獲得最佳的標記效果。
蛋白質的質量和純度:較高質量和純度的蛋白質有助于提高標記的效率和準確性。
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